Enfermedad de Chagas: Riesgo de transmisión por especies secundarias de triatominos capturados en etapa de vigilancia entomológica en las dos regiones del Paraguay

El principal vector intradomiciliar del Trypanosoma cruzi en el Cono Sur de América Latina ha sido el Triatoma infestans. En la última década se ha declarado la interrupción de transmisión de la enfermedad por esta especie en varias áreas endémicas. El T. cruzi interactúa con triatominos silvestres y reservorios mamíferos, por ello hay un riesgo permanente de la invasión de viviendas por especies secundarias como T. sordida y nativas de focos selváticos como: T. guasayana, T. guasu, Panstrongylus geniculatus, P. megistus que deben ser vigiladas para evitar el proceso de colonización de las viviendas. El objetivo fue evaluar el potencial riesgo de transmisión de la enfermedad de Chagas por especies secundarias de triatominos capturados en etapa de vigilancia entomológica en áreas endémicas de las regiones Oriental y Occidental del país. Se aplicaron técnicas moleculares asociadas a indicadores entomológicos a un total de 759 ejemplares de 4 especies de triatominos capturados en las dos regiones. Se detectó colonización del 19% por la especie T. sordida en viviendas del Departamento de Concepción. De las especies T. guasayana, T. guasu, P. geniculatus consideradas especies del ambiente selvático, se capturó al menos 1 ejemplar en cada departamento en el intradomicilio. De 759 ejemplares analizados, se detectaron 17 con infección natural con T. cruzi (2,2%), de los cuales 2 eran de P. geniculatus y 1 de T. guasayana, ambos del intradomicilio. Estos hallazgos ponen en evidencia que existe un potencial riesgo de transmisión de T. cruzi por estas especies de triatominos.

The main intradomiciliary vector of Trypanosoma cruzi in the Southern Cone of Latin America has been Triatoma infestans. In the last decade, the decrease in transmission of the disease by this species has been declared in endemic areas. T. cruzi interacts with wild triatomines and mammalian reservoirs, therefore there is a permanent risk of invasion of dwellings by secondary species such as T. sordida and native to jungle foci such as: T. guasayana, T. guasu, Panstrongilus geniculatus, P. megistus that should be monitored to avoid the process of colonization of dwellings. The objective of the study was to evaluate the potential risk of transmission of Chagas disease by secondary triatomine species captured in the entomological surveillance stage in endemic areas of the Eastern and Western regions of the country. Molecular techniques associated with entomological indicators were applied to a total of 759 specimens of 4 species of triatomines captured in the two regions. Colonization of 19% by the species T. sordida was detected in dwellings of the department of Concepción. At least one specimen of the species T. guasayana, T. guasu, P. geniculatus considered species of the jungle environment was captured in each department in the intradomiciliary environment. Of the total number of specimens analyzed (759), 17 were detected with natural infection with T. cruzi (2.2%), of which 2 were of P. geniculatus and 1 of T. guasayana both from intradomiciliary environment. These findings show that there is a potential risk of transmission of T. cruzi by these triatomine species.

Hisopado endocervical en mujeres con síntomas de COVID-19 provenientes de departamentos del Paraguay / Endocervical swabbing in women with COVID-19 symptoms from departments of Paraguay

INTRODUCCIÓN: El COVID-19 es eminentemente una infección de transmisión e inicio respiratorio, se discute la existencia de otras fuentes de contagio. El receptor viral ACE2 también ha sido detectado en el útero y en la vagina; de allí se ha planteado el compromiso del virus SARS-CoV-2 sobre el sistema genitourinario y sus posibles repercusiones en el embarazo. OBJETIVO: Determinar la presencia de SARS-CoV-2 en muestras endocervicales de mujeres con COVID-19 en departamentos del Paraguay. PACIENTES Y MÉTODOS: Diseño observacional prospectivo, de corte transverso. Se reclutaron 200 mujeres desde agosto 2020 hasta febrero 2021, con no más de 48/72 h de un resultado previo positivo de hisopado nasofaríngeo para SARS-CoV-2 por retrotranscriptasa reversa-reacción en cadena de la polimerasa (en inglés rt-RT-PCR) y que aceptaron ingresar al estudio. Se llenó un cuestionario clínico epidemiológico. Las tomas de muestras se realizaron en servicios de salud del Ministerio de Salud Pública y Bienestar Social (MSP y BS), domicilios y albergues de los distintos departamentos de Paraguay. Cada paciente fue sometida a un hisopado con hisopos de dacron o citobrush endocervical para la detección de SARS-CoV-2 por rt RT-PCR. Resultados: Las mujeres estudiadas tenían una edad media de 46,5 años (IC 95% 31,5-62,5). Refirieron contagio comunitario con SARS-CoV-2 en 75,5%, 13,5% en el hogar, 8,5% en el lugar de trabajo y 1,5% en el extranjero. Las manifestaciones clínicas fueron: 30%, síndrome gripal, fiebre 22,5%, tos 20%, anosmia 15,5%, trastornos digestivos 15,5%, y otros se presentaron con menor frecuencia. Las muestras de hisopados o citobrush endocervical sometidas a rt-RT-PCR para la deteccción de SARS Cov-2, resultaron negativas en las 200 mujeres de estudio. Discusión: Cabe destacar que las muestras vaginales fueron tomadas dentro de las 24-72 h de haber obtenido un resultado positivo para SARS-CoV-2 en el hisopado nasofaríngeo y que 62,5% de las mujeres se encontraban internadas en módulos respiratorios. Se discute la razón de la negatividad de los exámenes y su trascendencia. CONCLUSIÓN: No se detectó infección con SARS-CoV-2 en la región endocervical de 200 mujeres con manifestaciones clínicas de COVID 19 y evaluadas dentro de las 48/72 h de un resultado positivo nasofaríngeo para SARS Cov-2. Los resultados en la población de estudio concuerdan con otros estudios reportados en la literatura científica.

BACKGROUND: COVID-19 is an eminently respiratory transmissible infection of respiratory initiation, the existence of other sources of contagion is discussed. The ACE2 viral receptor has also been detected in the uterus and vagina; Hence, the involvement of the SARS-CoV-2 virus on the genitourinary system and its possible repercussions on pregnancy has been raised. AIM: To determine the presence of SARS-CoV-2 in endocervical samples of women with COVID-19 in the departments of Paraguay. METHODS: Designed as a prospective observational of transverse cohort. Two hundred women were recruited from August 2020 to February 2021, with no more than 48/72 hours of a previous positive nasopharyngeal swab result for SARS-CoV-2 by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (rt-RT-PCR) and who agreed to participate in the study. A clinical epidemiological questionnaire was completed. The samples were taken in health services of the MSPYBS (Public Ministry of Health and Social Welfare), homes and shelters in the different departments of Paraguay. Each patient underwent a swab (dacron swabs) or endocervical cytobrush for the detection of SARS-CoV-2 by rt-RT-PCR. RESULTS: Women recruited had a mean age of 46.5 years (95% CI 31,562.5). They reported contagion with SARS-CoV-2: 75.5% in the community, 13.5% at home, 8.5% in the place of work and 1.5% abroad. The clinical manifestations were: 30% flu syndrome, 22.5% fever, 20% cough, 15.5% anosmia, 15.5% digestive disorders, among other symptoms. The swabs or endocervical cytobrush samples subjected to rt-RT-PCR for the detection of SARS-CoV-2 were negative in the 200 study women. Discussion: It should be noted that the vaginal samples were taken within 24-72 hours after obtaining a positive result for SARS-CoV-2 in the nasopharyngeal swab and that 62.5% of the women were hospitalized in respiratory modules. The reason for the negativity of the exams and their significance are discussed. CONCLUSION: No SARS Cov-2 infection was detected in the endocervical region of 200 women with clinical manifestations of COVID 19 and evaluated within 48/72 hours of a positive nasopharyngeal result for SARS Cov-2. The results in the study population agree with the findings of other studies reported in the literature.

Técnicas moleculares integradas a la vigilancia entomológica de vectores de la enfermedad de Chagas: Estudio del vector secundario Triatoma sordida en la Región Oriental del Paraguay / Molecular techniques integrated to the entomological surveillance of Chagas disease vectors: Study of the secondary vector Triatoma sordida in the Eastern Region of Paraguay

Las técnicas moleculares para la detección de infección natural y fuente de alimentación en vectores secundarios de la enfermedad de Chagas cuando son aplicadas a ejemplares capturados en áreas endémicas, históricamente ocupadas por Triatoma infestans, proporcionan a las investigaciones epidemiológicas respuestas más exactas con relación a la transmisibilidad de la enfermedad. El presente estudio tiene como objetivo emplear biomarcadores moleculares para evaluar el impacto de la infestación intra y peridomicilar de Triatoma sordida en viviendas bajo vigilancia entomológica de departamentos de la Región Oriental del Paraguay en el período 2007 al 2015. Un total de 559 ejemplares de T. sordida capturados en 253, 91 y 52 viviendas de los departamentos Paraguarí, San Pedro y Cordillera, respectivamente fueron analizados. La infestación detectada fue del 24% al 48% así como una elevada colonización intradomiciliar del 5% al 36% en los tres departamentos. La detección molecular de infección natural osciló entre el 14% y 44%; y en 111 ejemplares se determinó la fuente de alimentación. El marcador molecular citocromo b permitió demostrar por vez primera un elevado porcentaje de triatominos con sangre humana como fuente de alimentación, principalmente en Cordillera con un 82% (28/34 T. sordida capturados). Estos hallazgos dejan en evidencia el avance del T. sordida en la ocupación del nicho ecológico de T. cruzi y la capacidad de esta especie secundaria como vector en la transmisión de T. cruzi en comunidades de la Región Oriental

When molecular techniques for the detection of natural infection and blood meal source in secondary vectors of Chagas disease are applied to specimens captured in endemic areas, historically occupied by Triatoma infestans, provide more accurate answers to questions about transmissibility of the illness and further contribute to the epidemiological studies. The aim of this study was to evaluate the impact of intra and peridomiciliary infestation of Triatoma sordida in households from the departments of the Eastern Region of Paraguay, under entomological surveillance during the period 2007 to 2015, by using the molecular biomarkers technology. A total of 559 specimens of T. sordida captured in 253, 91 and 52 households from Paraguarí, San Pedro and Cordillera departments, respectively, were analyzed. The infestation detected was from 24% to 48% as well as a high intradomicialiary colonization from 5% to 36% in the three departments. The molecular detection of natural infections ranged from 14% to 44% and in 111 specimens the meal source was identified. The molecular marker cytochrome b allowed to demonstrate, for the first time, high frequency of triatomines with human blood as a food source, mainly in Cordillera as it was determined in 82% (28/34) of the T. sordida captured. These findings demonstrate a progress of T. sordida into the ecological niche of T. cruzi and the abillity of this secondary species as a vector of the transmission of T. cruzi in communities from the Eastern Region of Paraguay

Fuente de alimentación de ejemplares de Triatoma sordida en un área con alto riesgo de domiciliación en el Chaco Paraguayo / Blood meal source of specimens of Triatoma sordida in an area with high risk of domiciliation in the Paraguayan Chaco

En el presente estudio evaluamos indicadores entomológicos (índices de infección, colonización e infección natural) de ejemplares de Triatoma sordida capturados en el intra y peridomicilio de viviendas del Chaco Paraguayo en el período 2014 al 2016. El objetivo fue comparar con los hallazgos previamente reportados en el periodo 2010 al 2013 en la misma región. Además se ha incorporado la detección de fuente de alimentación como complemento para definir el riesgo de domiciliación de este vector secundario. Se aplicaron técnicas moleculares asociados a indicadores entomológicos y epidemiológicos a 220 ejemplares de T. sordida capturados en 67 viviendas de 24 localidades del Chaco. Se detectó infestación y colonización por T. sordida en el intradomicilio 13/67 (19%) y 5/13 (38%) y en el peridomicilio 54/67 (81%) y 43/54 (80%), respectivamente. Se detectó infección con T. cruzi en un 17,3% de los ejemplares analizados. La fuente de alimentación pudo detectarse en tan solo 13 de 220 ejemplares (6%), todos resultaron positivos para sangre de gallina y correspondían a captura en el peridomicilio. El índice de infestación intradomiciliar fue del 19%, superior al de años anteriores y similar a las zonas históricamente endémicas de la Región Occidental (18%-20%). El riesgo de transmisión intradomiciliar sigue siendo elevado porque en 3 de 5 viviendas con ninfas de T. sordida, los ejemplares estaban infectados con T. cruzi. Los indicadores entomológicos obtenidos en el presente estudio concuerdan con resultados previos de nuestro equipo, y confirman la capacidad vectorial de este triatomino secundario en la transmisión de la enfermedad de Chagas(AU)

Chagas disease: national survey of seroprevalence in children under five years of age conducted in 2008

BACKGROUND Since the early 1990s, programs to control Chagas disease in South America have focused on eradicating domiciliary Triatoma infestans, the main vector. Seroprevalence studies of the chagasic infection are included as part of the vector control programs; they are essential to assess the impact of vector control measures and to monitor the prevention of vector transmission. OBJECTIVE To assess the interruption of domiciliary vector transmission of Chagas disease by T. infestans in Paraguay by evaluating the current state of transmission in rural areas. METHODS A survey of seroprevalence of Chagas disease was carried out in a representative sample group of Paraguayans aged one to five years living in rural areas of Paraguay in 2008. Blood samples collected on filter paper from 12,776 children were tested using an enzyme-linked immunosorbent assay. Children whose serology was positive or undetermined (n = 41) were recalled to donate a whole blood sample for retesting. Their homes were inspected for current triatomine infestation. Blood samples from their respective mothers were also collected and tested to check possible transmission of the disease by a congenital route. FINDINGS A seroprevalence rate of 0.24% for Trypanosoma cruzi infection was detected in children under five years of age among the country’s rural population. Our findings indicate that T. cruzi was transmitted to these children vertically. The total number of infected children, aged one to five years living in these departments, was estimated at 1,691 cases with an annual incidence of congenital transmission of 338 cases per year. MAIN CONCLUSION We determined the impact of vector control in the transmission of T. cruzi, following uninterrupted vector control measures employed since 1999 in contiguous T. infestans-endemic areas of Paraguay, and this allowed us to estimate the degree of risk of congenital transmission in the country.

Coinfección leishmania infantum, VIH e histoplasma capsulatum: manifestaciones dermatológicas / Leishmania infantum, HIV and hystoplasma capsulatum coinfection: dermatologic manifestations

La coinfección Leishmania/VIH es frecuente y por lo general son casos de leishmaniosis visceral (LV), sin embargo, Leishmania infantum, el agente etiológico, también puede causar formas cutáneas en pacientes VIH-positivos. Los parásitos llegan a la piel por difusión, en una nueva infección o reactivación de una infección latente. Existen técnicas moleculares que confirman el diagnóstico y caracterizan a la especie. En estos pacientes también se presenta como infección oportunista la histoplasmosis, reconocida como marcador de SIDA y causada por Histoplasma capsulatum. En este trabajo describimos un caso de coinfección SIDA, histoplasmosis y LV asociado a lesiones cutáneas. Paciente de sexo masculino, adulto, residente en J.A. Saldívar, VIH positivo (2010), sin tratamiento antirretroviral. En el 2012 es internado en el Instituto de Medicina Tropical (IMT) con fiebre, anemia, hepato-esplenomegalia, frotis de médula ósea y rk39 negativos para Leishmania, recibe tratamiento con Anfotericina B. En el 2013 presenta síndrome febril prolongado y en médula ósea se encuentran amastigotes de Leishmania sp. En el 2014 presenta úlceras en el rostro en las que se observan es porosmicóticos de H. capsulatum y amastigotes de Leishmania sp. Se confirma L. infantum por técnicas de biología molecular. En el caso estudiado concluimos que la presentación dérmica es causada por L. infantum, caracterizada por técnicas moleculares, eH. capsulatum que se presenta en concomitancia debido al estado inmunológico. Cabe resaltar la importancia del diagnóstico diferencial para aplicar el tratamiento correcto y además la manifestación clínica que normalmente no es asociada a esta especie de Leishmania.

Leishmania/HIV coinfection is frequent and generally they are visceral leishmaniasis cases(VL). However, Leishmania infantum, the etiological agent, could also cause cutaneousforms in HIV-positive patients. The parasites reach the skin through diffusion, a newinfection or a reactivation of a latent infection. There are molecular techniques that confirmthe diagnosis and characterize Leishmania species. These patients also present otheropportunistic infections like histoplasmosis, well known as an AIDS marker and caused byHistoplasma capsulatum. In this work, we describe one HIV/histoplasmosis/VL coinfectioncase associated to cutaneous lesions. The patient was a male, adult, coming from the city ofJ.A. Saldívar, HIV positive (since 2010), without antiretroviral treatment. He was hospitalized in 2012 at the Instituto de Medicina Tropical (IMT) with fever, anemia,hepatosplenomegaly, bone marrow smear and rK39 both negative for Leishmania. He wastreated with Amphotericin B. In 2013, he presented a prolonged febrile syndrome andLeishmania amastigotes were observed in the bone marrow. In 2014, the patient presentedulcerations on the face where H. capsulatum fungal spores and Leishmania amastigoteswere observed. L. infantum was confirmed by molecular methods. In the case under studywe can conclude that the dermal manifestation was caused by L. infantuma ccording to thecharacterization by molecular techniques, and simultaneously H. capsulatum was presentdue to his immunological status. It should be emphasized the importance of the differentialdiagnosis in order to apply the right treatment and also the uncommon clinicalmanifestation that is not associated to this Leishmania species.

Triatoma sordida: indicadores de adaptación y transmisión de trypanosoma cruzi en intradomicilio del Chaco Paraguayo / Triatoma sordida: indicators of adaptive capacity and trypanosoma cruzi intradomicile transmission in the Paraguayan Chaco

El gran Chaco es una eco-región que incluye Argentina, Bolivia y Paraguay; donde la trasmisión vectorial de la enfermedad de Chagas por Triatoma infestans (vector principal), constituye hasta la fecha un problema de salud pública. El Chaco paraguayo ocupa el 25% de esta región, caracterizada por una baja densidad poblacional y localidades dispersas. El objetivo de este estudio fue determinar el rol potencial de la especie Triatoma sordida (vector secundario) en el ciclo doméstico de transmisión de Trypanosoma cruzi. Se aplicaron técnicas moleculares asociadas a indicadores entomológicos y epidemiológicosa 436 ejemplares de T. sordida capturados en 147 viviendas del Chaco Paraguayo. Se detectó infestación y colonización en el intradomicilio y peridomicilio por T. sórdida en 12 (8.2%) y 79 (53.7%) viviendas de las 147 evaluadas, respectivamente. Al menos un ejemplar infectado con T. cruzi fue detectado por PCR en las 12 viviendas con colonización intradomiciliar y en dos de ellas por caracterización molecular se detectó en ninfas el genotipo TC2. Adultos y ninfas en el peridomicilio de 4 viviendas dieron positivo para el genotipo TC1. Se estima un elevado riesgo de transmisión de T. cruzi intradomiciliar del 87%. Estos resultados evidencian capacidad adaptativa de esta especie en el domicilio, y un incremento de su potencial vectorial para transmitir la enfermedad de Chagas en el Chaco Paraguayo.

The Gran Chaco is an eco-region that includes Argentina, Bolivia and Paraguay; where the vectorial transmission of Chagas disease by Triatoma infestans (main vector) is a public health problem up to date. The Paraguayan Chaco occupies 25% of this region, characterized by low population density and dispersed locations. The aim of this study wasto determine the potential role of the specie Triatoma sordida (secondary vector) in the domestic cycle of transmission of Trypanosoma cruzi. Molecular techniques associated with entomological and epidemiological indicators were applied in 436 specimens of T. sordida captured in 147 dwellings of the Paraguayan Chaco. Infestation rate and colonization by T. Sordida was detected in the intradomicile and peridomiciliary in 12 (8.2%) and 79 (53.7%)of the 147 dwellings, respectively. In 12 houses were colonization was observed, at leastone specimen was PCR-T. cruzi positive, and in two of them genotype TC2 of T. cruzi were detected innymphs by molecular characterization. Adults and nymphs in the peridomiciliary of 4 houses were positive for genotype TC1.A high risk of indoor transmission of T. cruzi isestimated in 87%. These results demonstrate adaptive capacity of this specie in the intradomicile, and increased vector potential to transmit Chagas disease in the Paraguayan Chaco.

Análisis filogenético y de presión evolutiva de secuencias nucleotídicas del gen VP4 de especies de enterovirus humanos / Phylogenetic and evolutive pressure analyses of nucleotide sequences of VP4 gene of human enterovirus species

El género Enterovirus es un grupo viral que afecta a un amplio rango de hospederos, entre ellos los humanos (especies A, B, C, y D), causan enfermedades respiratorias, gastrointestinales, neurológicas, y otras, y son altamente contagiosos. Los síntomas pueden ser leves o graves. El objetivo del trabajo fue analizar la variación nucleotídica, filogenética y de presión evolutiva de secuencias nucleotídicas del gen VP4 de las cuatro especies que afectan a los humanos. Se emplearon 92 secuencias nucleotídicas disponibles en la base de datos GenBank; éstas se editaron con el software BioEdit y se alinearon con Clustal W; las relaciones filogenéticas se determinaron con MEGA6, y las presiones evolutivas con los algoritmos SNAP y SLAC. Se encontró que la identidad nucleotídica mínima intra-especie fue de 43,2% (especie B) a 72,6% (especie D). Los genotipos más variables por especie fueron EV-71 (A), Echovirus 2 (B), EV-118 (C), y EV-94 (D). El análisis de presión evolutiva mostró que el gen VP4 en las cuatro especies evoluciona bajo presión selectiva negativa. Esto indicaría que la alta tasa mutacional y eventos de recombinación no tienen un rol significativo en la evolución de este gen, debido probablemente a la localización interna de la proteína VP4.

The Enterovirus genus is a viral group that affects a wide host range, including humans (species A, B, C and D), cause respiratory, gastrointestinal, and neurologic disease, amongothers, and are highly contagious. The symptoms range from mild to severe. The objectiveof this study was to perform a nucleotidic variation, phylogenetic and selective pressureanalyses of the VP4 gene from the four enterovirus species that affect humans. Ninety-twonucleotide sequences (available in the GenBank database) were employed; they were edited with Bio Edit software and aligned with Clustal W; the phylogenetic relationships weredetermined with MEGA6, and the evolutive pressures with SNAP and SLAC algorithms. Itwas found an intra-species nucleotide identity of at least 43,2% (species B) to 72,6% (species D). The more variable genotypes by species were EV-71 (A), Echovirus 2 (B), EV-118 (C), and EV-94 (D). The selective pressure analysis showed that VP4 gene of the fourspecies evolves by negative pressure. This would indicate that the high mutation rate andrecombination events do not have a significant role in the evolution of this gene, probablydue to the internal localization of the VP4 protein.

Detección molecular de belactamasas de espectro extendido (BLEE) en enterobacterias aisladas en Asunción / Molecular detection of extended spectrum beta-lactamase (esbl) in enterobacteria isolated in Asunción

Las betalactamasas de espectro extendido (BLEE), son enzimas responsables de la hidrólisis del anillo betalactámico de penicilinas y cefalosporinas, excepto carbapemenes, inhibiendo así su actividad terapéutica. Si bien es posible la detección fenotípica de este mecanismo de resistencia por métodos convencionales, sólo los métodos moleculares permiten la identificación del gen responsable de dicha resistencia. El objetivo de este estudio descriptivo retrospectivo fue identificar los genes blaCTX-M2, blaPER-2, blaSHV y blaTEM, en aislamientos de enterobacterias productoras de BLEE,; de muestras clínicas colectadas entre julio 2007 y abril 2008, provenientes de dos hospitales de referencia de Asunción, Paraguay. La detección molecular de los genes se realizó por reacción en cadena de la polimerasa empleando oligonucleótidos específicos. De los 232 aislados BLEE analizados, el 83% (n=192) portó al menos un gen bla, en el 17% (n=40) restante no fue detectado ninguno de los genes incluido en el estudio. Se observaron las siguientes frecuencias: 49% (94/192) blaCTX-M2, 45% (86/192) blaSHV, 40% (77/192) blaTEM y 7% (13/192) blaPER-2. En el 47% (90/192) se detectó más de un gen, siendo la combinación blaCTX-M2+blaTEM+blaSHV, la más frecuente observada en 32 aislados. El blaCTX-M2 como el gen más frecuente en este estudio; concuerda con lo reportado en nuestro país y en Argentina. Este es el primer reporte de la presencia de blaTEM y blaSHV en Paraguay. Es de gran importancia el estudio de otros genes codificantes de resistencia, considerando la emergencia de otras BLEE en la región como blaCTX-M15 con actividad predominantemente ceftazidimasa.

Extended spectrum beta-lactamases (ESBLs), are enzymes responsible for thehydrolysis of the beta-lactam ring and resistance to both cephalosporins and penicillins,except carbapenems, therefore inhibiting its therapeutics activity. Even though, detectionof the phenotypic resistance mechanism by conventional methods is possible, onlymolecular methods allow identification of the gene responsible for the resistance. Theobjective of this retrospective study was to identify the blaCTX-M2, blaPER-2, blaSHV, blaTEMgenes in ESBL-producing enterobacteriaceae isolates, recovered from clinical samples collected between July 2007 and April 2008, from two reference hospitals in Asunción,Paraguay. Molecular gene detection was performed by polymerase chain reaction usingspecifics oligonucleotides. Out of the tested 232 ESBL-producing isolates, 83% (n=192)carried at least one of the bla genes as follows; 49% (94/192) blaCTX-M2, 45% (86/192)blaSHV, 40% (77/192) blaTEM and 7% (13/192) blaPER-2. In the rest 17% (n=40) none of thegenes included in this study was detected; in 47% (90/192) more than one gene wasdetected, resulting blaCTX-M2 + blaTEM + blaSHV as the most frequent combination in 32isolates. The presence of blaCTX-M2, as the most frequent codifying genes of BLEE is inagreement with previous reports in Paraguay and Argentina. This is the first report of thepresence of blaTEM and blaSHV circulating in Paraguay. It is of much importance the study ofothers codifying resistance genes, taking into account the emergence of other BLEE in theregion, such as blaCTX-M15, predominantly with ceftazidimase activity.

Portación de Staphylococcus aureus multiresistentes a antimicrobianos en cavidad bucal de niños que concurren para un tratamiento en una clínica odontológica, Paraguay / Carriage of Multidrug-resistant Staphylococcus aureus in the Oral Cavities of Children Presenting for Treatment at a Dental Clinic in Paraguay

Introducción: Staphylococcus aureus es un microorganismo que posee características particulares de virulencia y resistencia a los antibióticos para uso clínico cuya diseminación es de gran importancia en salud pública. Objetivo: Identificar S. aureus sensibles y resistentes a antimicrobianos, colonizantes en cavidad bucal de niños que concurrieron para un tratamiento a una Clínica Odontológica en Asunción. Materiales y Métodos: En este estudio descriptivo, observacional realizado de agosto a septiembre de 2013, se incluyeron niños de 2 a 15 años de edad. Hisopados de cavidad bucal fueron colectados y cultivados en agar-manitol-sal. Los aislados de S. aureus fueron caracterizados respecto a la susceptibilidad a 11 antibióticos y por métodos moleculares se buscó la presencia del gen mecA y del factor de virulencia pvl. Se empleó un cuestionario sobre datos socio-demográficos y factores de riesgo asociados a infección con S. aureus. Resultados: Se incluyeron 112 niños. Se aisló S. aureus en 37 (33%) hisopados y 35 (94,6%) aislados presentaban resistencia a al menos un antibiótico. Resultaron resistentes a: Penicilina (89%), Cloranfenicol (16,2%), Oxacilina (10,8%), Eritromicina (8%), Clindamicina (8%), Gentamicina (5,4%) y un aislado con resistencia intermedia a Ciprofloxacina (2,7%). Cuatro aislados de S. aureus presentaban resistencia a múltiples drogas, los mismos portaban el gen mecA. No se detectó portación del factor de virulencia PVL. Conclusión: La elevada portación en cavidad oral de S. aureus multiresistentes en niños sin factores de riesgo como hospitalización previa o consumo de antibióticos, implica un alto riesgo para posibles infecciones endógenas, además del potencial de transferencia de determinantes de resistencia entre gérmenes de flora bucal normal .

Introduction: Staphylococcus aureus isa bacterium with special characteristicsof virulence and resistance to theantibiotics used in clinical practice, andwhose spread presents a significantpublic health challenge...

Estandarización de la técnica PCR-RFLP del gen mitocondrial cyt b como herramienta para la identificación de fuentes de alimentación de insectos hematófagos / Standardization of a PCR-RFLP technique based on RESUMEN mitochondrial cyt b gen as a tool to identify feeding sources of hematophagous insects

La identificación de la fuente de alimentación de insectos hematófagos puede proporcionar información sobre la capacidad vectorial, patrones de alimentación en condiciones naturales y proveer indirectamente datos sobre probables reservorios de enfermedades. Varias técnicas de identificación son empleadas, entre ellas las más utilizadas son las basadas en reacciones antígeno-anticuerpo. Actualmente, se han desarrollado ensayos moleculares, algunos de ellos permiten detectar e identificar solo sangre humana. Otros como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) del gen mitocondrial citocromo b (cyt b), que ha mostrado alto grado de sensibilidad y especificidad, permite detectar e identificar otras especies de vertebrados. El objetivo del trabajo fue estandarizar la técnica PCR-RFLP del gen mitocondrial citocromo b (cyt b) para determinar la fuente de alimentación sanguínea de insectos. Inicialmente se realizó un análisis bioinformático para la búsqueda y alineamiento de secuencias del gen cyt b de los potenciales huéspedes, con secuencias que están disponible en el GenBank. Se utilizaron 10 muestras de sangre de potenciales huéspedes vertebrados (humano, perro, gallina y roedor) y para la reacción de PCR se empleó un par de cebadores universales que amplifican una región del gen cyt b, seguido de cortes con dos enzimas de restricción (RFLP) (Hae III y Mwo I), generando patrones de electroforesis específicos para los diferentes vertebrados. Se logró la estandarización de la técnica de PCR del gen cyt b que fue capaz de detectar ADN de al menos 1 μL de sangre observándose el producto de amplificación de 358 pb. El análisis de los patrones de bandas obtenidos con el corte de las enzimas mostró los tamaños de fragmentos esperados para humano, gallina, perro y roedor. Estos resultados muestran la utilidad de la técnica PCR-RFLP del gen cyt b que, con un simple par de cebadores seguido del corte con dos enzimas de restricción...

Identification of feeding sources of hematophagous insects can provide informationabout the vectorial capacity,feeding patternsin natural conditionsand indirectlyprovidedataon possible disease reservoirs preferences.Several identificationtechniquesare used,most of them based on antigen-antibody reactions.Recently molecular assayshave been developedand, some ofthese assayscandetect andidentificateonlyhuman blood. Otherassays,likethepolymerase chain reaction (PCR)basedonmitochondrialcytochromebgene,have shown high sensitivity and specificityallowingdetectionand identificationofothervertebrate species. The aim of this studywas tostandardizea PCR-RFLP basedonmitochondrialcytochrome bgene(cyt b) inorder to determineblood mealfrom insects.Initially bioinformatic analysiswasperformed forsearching andalignmentofcyt bsequencesofpotential hosts availableattheGenBankdatabase.Blood samplesfrom potentialvertebrate hostswere usedand PCR was performed using specificprimersthat amplify aregionofcyt bgene. Theproducts were digestedwithrestriction enzymes (RFLP),generating specificelectrophoresis patterns forseveral vertebrates. The PCR technique forcyt bgene wasstandardized allowing the detection of at least 1μLof blood.The 359 bp band wascorrectly amplified and the profiles obtained after the enzyme digestion withHaeIIIandMwoI were the expected for human, chicken, dog and rodents. These resultsshowed the usefulness of the PCR-RFLP ofcyt bgenethat,with a single pair of primersfollowed digestionusing two restriction enzymes,allowed the differentiationof thevertebrate species of our interestthrough the patterns obtained without sequencinghavingalso the advantage of detecting small volumesof blood sample.

Aplicación de la PCR para la detección de género y complejos de Leishmania en diferentes tipos de muestras biológicas / Application of PCR for detection of Leishmania genus and complexes in different types of biological samples

La leishmaniosis es una enfermedad producida por diferentes especies del protozoario Leishmania agrupados en complejos, es transmitida por flebótomos presentando una variedad de síntomas clínicos. La técnica reacción en cadena de la polimerasa (PCR) permite amplificar regiones blanco específicas del género Leishmania y de los complejos Leishmania donovani y Leishmania braziliensis, directamente en muestras biológicas sin cultivos in vitro previo. En este estudio se realizó una evaluación descriptiva, durante el periodo 2001 a 2006, analizando 169 biopsias (piel y mucosas) y 31 aspirados de médula ósea en pacientes con sospecha clínica de leishmaniosis, además se evaluaron 44 muestras de bazo de caninos. Las muestras procedían de distintas zonas endémicas del país. Se detectó género Leishmania en el 71% de las biopsias (piel y mucosas), en 68% en los aspirados de médula ósea y en 82% de los bazos de caninos. Se identificó el complejo L. braziliensis en los pacientes con leishmaniosis cutánea y mucosa y el complejo L. donovani en pacientes con la forma visceral. Estos resultados han demostrado la utilidad de la técnica de PCR para la detección y caracterización de los parásitos de Leishmania en distintas muestras biológicas.

Identificación molecular de linajes y sub-linajes de Trypanosoma cruzi en niños infectados congénitamente provenientes de áreas endémicas del Paraguay / Molecular identification of Trypanosoma cruzi lineages and sublineages in congenitally infected children from endemic areas of Paraguay

La tripanosomiasis americana es una infección causada por un protozoario flagelar Trypanosoma cruzi que está diseminado por todo el continente Americano. T. cruzi es una especie heterogénea que comprende varias sub-poblaciones que circulan en hospederos vertebrados domésticos y salvajes, e invertebrados. Esta diversidad genética ha sido detectada con técnicas moleculares demostrándose que circulan clones mayoritarios en varios hospederos y en diferentes áreas geográficas de América Latina. Aislados de T. cruzi han sido divididos en dos grupos genéticos nombrados por consenso internacional T. cruzi I (linaje 2-asociado al ciclo enzoótico) y T. cruzi II (linaje 1-asociado al ciclo doméstico). La interacción de los clones infectivos de T. cruzi y el hospedero humano podrían determinar la morbilidad de la enfermedad. En este trabajo se empleó la técnica PCR para amplificar genes constitutivos de T. cruzi, como el gen 24S Ribosomal y el gen mini exón (ME) y se detectaron linajes de T. cruzi en 112 muestras (83%) de un total de 135 muestras de niños infectados provenientes de dos departamentos endémicos para la enfermedad de Chagas en Paraguay (Cordillera y Paraguarí). En cuanto a la procedencia de las mismas, 53 muestras eran de Paraguarí y 59 muestras de Cordillera. Los sub-linajes encontrados fueron: Paraguarí: 34TcIIc, 17 TcIId, 1 muestra TcIIb-IIe y 1 muestra ND (no determinada), En Cordillera: 37 TcIIc, 19 TcIId, 1 muestra TcIIb-IIe y 2 muestras no determinadas. No se encontró linaje I, selvático en ninguna de las 2 áreas estudiadas

Transmisión congénita de la enfermedad de Chagas en el Paraguay / Congenital transmission of Chagas disease in Paraguay

Las estrategias actuales recomendadas para el diagnostico de la infección congénita chagásica requieren del diagnóstico serológico convencional en mujeres embarazadas para detectar su infección y la confirmación parasitológica en recién nacidos infectados verticalmente. La detección de parásitos en sangre no resulta un método fácil de aplicar a gran escala y a nivel de salud pública por lo que se recomienda finalmente la serología convencional, es decir la detección de IgG anti-T. cruzi en infantes mayores a 8 meses de edad. Demostramos que la descentralización de los estudios serológicos de los grandes Hospitales Regionales ayuda a la rápida identificación de las mujeres infectadas, como también el registro de su estado de infección en las fichas familiares, prenatal y pediátrica. Los resultados de más de 15 años de estudio de nuestro grupo, indican que a pesar de la alta sensibilidad de la técnica reacción en cadena de la polimerasa (PCR), resulta muy complejo su empleo con fines de diagnóstico a nivel rural y en gran escala, siendo muy útil para evaluar el tratamiento realizado en los niños infectados. La serología convencional permite la detección inequívoca de anticuerpos deltipo IgG en infantes infectados congénitamente después de los 8 meses de edad (tiempo máximo observado para el clearence de anticuerpos maternos). Sin embargo esta estrategia hace que el tiempo requerido en el seguimiento para descartar transmisión congénita disminuya la adherencia durante el periodo de seguimiento con una importante pérdida de niños que no son traídos al control. La detección de casos de transmisión congénita aumenta notablemente cuando se utiliza una combinación de las técnicas serológicas convencionales y un ELISA que hemos diseñado con el antígeno recombinante de fase aguda, “shed acute phase antigen” (SAPA) que permite la detección inequívocade infantes infectados congénitamente a los 3 meses de edad.

The current strategies recommended for the diagnosis of congenital Chagas disease require the conventional serological diagnosis in pregnant women to detect their infectionand the parasitological confirmation in the congenitally infected newborns. The detection of parasites in blood is not a method easy to apply at large scale and at public health level. Therefore, the conventional serology is recommended, i.e. detection of anti-T.cruzi IgG in infants older than eight months of age. Considering these recommendations, ourgroup has designed operative strategies in endemic rural areas that allow the rapid detection and treatment of congenitally infected infants. We have demonstrated that the decentralization of the serological studies from the Regional Hospitals contributes to thefast identification of the infected women together with the registration of their infection status in the family, prenatal and pediatric files. The results of over fifteen years of study of our group indicate that, in spite of the high sensitivity of PCR, its use with diagnosis purposes is very complex at large scale and in rural areas. However, the polymerase chain reaction (PCR) technique is very useful to evaluate the treatment of infected children The conventional IgG serology allows the unequivocal detection of congenitally infected infants after eight months of age (maximum time observed for the clearance of maternal antibodies). However, this strategy makes that the time required to rule out a congenital transmission in the follow-up diminishes adherence with an important loss of children that are not brought to control. The detection of congenital transmission casesincreases remarkably when a combination of the conventional serological techniques and an ELISA that we designed with the recombinant protein “shed acute phase antigen”(SAPA) is used, allowing the unequivocal detection of congenitally infected children at three months of age.

Diarrea por Rotavirus: Detencion del Genoma Viral en heces por tecnicas Moleculares / Annual Reprts 1997 / Diarrea by Rotavirus: Detection of Viral Genome in feces by Molecular techniques

A continuación presentamos los resultados preliminares sobre la detección de genomas de rotavirus en 27 de 121 (22 por ciento) muestras de heces de niños con edades compredidas desde 0 y 5 años con cuadros de diarrea aguda de más de dos días. Las muestras analizadas fueron comparadas con los estudios convencionales, frotis y/o coprocultivo, y en algunos casos se ha comparado la sensibilidad con la técnica inmunológica conocidas como aglutinación de partículas de latex. El producto de la extracción del acido ribonucleico (ARN) total presente en 40 microlitos de heces permitió detectar en seis muestras ARN viral por medio de una electroforesis en gel de agarosa al 3 por ciento y visualizado con bromuro de etidio. Las 6 muestras positiva fueron comparadas con patrones de referencia en geles de poliacrilamida teñidos con argéntica. Los resultados preliminares indican que las ténicas moleculares empleadas han sido fáciles, rápidas y sensibles teniendo como ventaja las bajas exigencias en cuanto a la conservación y trasporte de materiales

Detención de Adenovirus en cultivos celulares a partir de Aspirados Nasofaringeos / Annual Reports 1997 / Detection of Adenovirus in cell culture from Nesopharyngeal Aspirates

Se investigó la etiología viral (adenovirus repiratorio sincicial) por aislamiento de cultivo celular e inmunofluorescencia (IF) de los ANF. El aislamiento en cultivo celular permitió detectar 5 muestras positivas para adenovirus por su efecto citopático característico, formación de racimos en células Hep2. El tiempo en dar el ECP en la 5 muestras positivas varió de 1 a 10 días y los mismos fueron confirmados por IF en las células infectadas. Al comparar la sensibilidad del cultivo celular frente a la inmunofluorescencia directa del aspirado nasofaringeo, el primero fue mucho mayor, debido a que sólo 1 de las 5 muestras positivas para la adenovirus fue visualizado en forma directa por IF. No se detectó la precencia de virus respiratorio sincicial en las 12 muestras analizadas, muestra que el estudio bacteriológico permitió detectar tres casos de coinfección por S. pneumonidea y adenovirus. Estos estudios preliminares sobre cultivo y aislamiento de los agentes virales en casos de niños con IRA nos permitirá guardar congelados los aislados y proceder a la carecterización antigénica y genética de los mismos

Estudio serològico neonatal de infecciòn por Toxoplasma Gondii / Serologic neonatal study situdy of Toxoplasma Gondii infection / Annual reports 1995

Este es un estudio descriptivo de cohorte para determinar cual era la transmisiòn congènita de toxoplasmosis en recièn nacidos de madres seropositivas por medio de la detecciòn de anticuerpos IgG e IgM anti T. gondii al nacer, y por seguimiento durante el primer año de vida a 50 niños de madres que dieron a luz en tres maternidades del Paraguay. El motivo que nos llevò a realizar este estudio es que nuestro paìs algunos gineco-obstetras apoyan la teorìa de que la transmisiòn puede efectivizarse por reactivaciòn de una infecciòn crònica. La serologìa basal fue realizada en sangre de cordòn de 632 niños del Instituto de Previsiòn Social (IPS), en suero de 500 madres de la Maternidad del Hospital de Clìnicas y en suero de 346 madres de puestos de salud del Dpto. de San Pedro. Las seroprevalencias de infecciòn a T. gondii detectadas en estas poblaciones fueron de 70 por ciento y 72 por ciento y 89 por ciento respectivamente. La prueba serològica empleada en el tamizaje basal fue el mètodo de ELISA indirecto, y en el seguimiento el ELISA doble sandwich para la detecciòn de IgM anti T. gondii. Se detectò un solo caso positivo con probable infecciòn congènita en la poblaciòn basal de 632 niños estudiados en la Maternidad del Instituto de Previsiòn Social. En los resultados serològicos obtenidos en los 50 niños, todos dieron resultados negativos por la prueba para detecciòn de anticuerpos IgM anti T. gondii al nacer y durante el primer año de vida. Presentando uno de ellos, seroconversiòn a los 15 meses, probablemente por infecciòn adquirida. La ausencia de transmisiòn congènita de toxoplasmosis en los niños del estudio, cuyas madres tenian serologìa de infecciòn crònica apoya la teorìa mundialmente reconocida que el riesgo de transmisiòn es en aquellas madres con primoinfecciòn durante el embarazo. Por esta razòn en paìses como el nuestro donde el diagnòstico de infecciòn congènita es muy costoso, serìa conveniente realizar un estudio serològico previo al llegar la mujer a la edad fèrtil.

Estudio serològico neonatal de infecciòn por Toxoplasma Gondii / Serologic neonatal study situdy of Toxoplasma Gondii infection / Annual reports 1995

Este es un estudio descriptivo de cohorte para determinar cual era la transmisiòn congènita de toxoplasmosis en recièn nacidos de madres seropositivas por medio de la detecciòn de anticuerpos IgG e IgM anti T. gondii al nacer, y por seguimiento durante el primer año de vida a 50 niños de madres que dieron a luz en tres maternidades del Paraguay. El motivo que nos llevò a realizar este estudio es que nuestro paìs algunos gineco-obstetras apoyan la teorìa de que la transmisiòn puede efectivizarse por reactivaciòn de una infecciòn crònica. La serologìa basal fue realizada en sangre de cordòn de 632 niños del Instituto de Previsiòn Social (IPS), en suero de 500 madres de la Maternidad del Hospital de Clìnicas y en suero de 346 madres de puestos de salud del Dpto. de San Pedro. Las seroprevalencias de infecciòn a T. gondii detectadas en estas poblaciones fueron de 70 por ciento y 72 por ciento y 89 por ciento respectivamente. La prueba serològica empleada en el tamizaje basal fue el mètodo de ELISA indirecto, y en el seguimiento el ELISA doble sandwich para la detecciòn de IgM anti T. gondii. Se detectò un solo caso positivo con probable infecciòn congènita en la poblaciòn basal de 632 niños estudiados en la Maternidad del Instituto de Previsiòn Social. En los resultados serològicos obtenidos en los 50 niños, todos dieron resultados negativos por la prueba para detecciòn de anticuerpos IgM anti T. gondii al nacer y durante el primer año de vida. Presentando uno de ellos, seroconversiòn a los 15 meses, probablemente por infecciòn adquirida. La ausencia de transmisiòn congènita de toxoplasmosis en los niños del estudio, cuyas madres tenian serologìa de infecciòn crònica apoya la teorìa mundialmente reconocida que el riesgo de transmisiòn es en aquellas madres con primoinfecciòn durante el embarazo. Por esta razòn en paìses como el nuestro donde el diagnòstico de infecciòn congènita es muy costoso, serìa conveniente realizar un estudio serològico previo al llegar la mujer a la edad fèrtil

Estudio cuantitativo de la denervación de los plexos nerviosos en el megacolon chagásico / Annual reports 1994 / Quantitative study of neural plexuses denervation in chagasic megacolon

El megacolon chagásico es la patología digestiva más frecuente observada en nuestro país en la etapa crónica de la enfermedad de Chagas. La destrucción de las células ganglionares del plexo mientérico por el Trypanosoma cruzi es considerada como la lesión inicial. Para determinar el grado y la distribución de la aganglionosis e hipoganglionosis de los plexos de Meissner y de Auerbach según la proporción células/mm, se analizaron histológicamente segmentos de megacolon de 10 pacientes adultos con serología positiva para Chagas. Todos los segmentos presentaron áreas de aganglionosis e hipoganglionosis severa de distribución multifocal a lo largo de los mismos, más acentuadas en el plexo de Auerbach y tambien en el extremo distal y en el tercio distal del segmento. (o a 0.17 células ganglionares por mm.), sin displasia neuronal. La lesión neuronal observada en el megacolon chagásico es multifocal y diseminada, y su mayor severidad en la zona rectosigmoidea se relacionaría con transtornos fisiológicos en la coordinación motora